PCR的条件是一段含有目的基因的DNA片段,和起关键作用的引物。要把DNA分子中的目的基因找出来,需要设计特定的引物,依靠引物的作用来特异性的扩增目的基因。
示例:最近想进行基因克隆,不知道通过RT-PCR法获取目的基因,怎样设计引物。是扩增目的基因的全序列还是部分序列,请不吝赐教。
答:请明确你的实验目的,是想进行基因克隆,还是检测表达,
如果是进行克隆,那么就应该是扩全长,若是检测就只要扩部分片段,
你的目的似乎是想扩出目的基因,所以应该是要扩全长。
步骤如下:
1。在genebank中搜到目的基因的全长mRNA序列;
2。确认目的片段的编码序列,也就是CDS;
3。根据CDS,在ATG及终止密码前后的序列来设计最佳引物;
--------------
那么所谓的全长就是指cDS了???而并非指整个mRNA序列?
请明确你的实验目的,是想进行基因克隆,还是检测表达,
如果是进行克隆,那么就应该是扩全长,若是检测就只要扩部分片段,
你的目的似乎是想扩出目的基因,所以应该是要扩全长。
步骤如下:
1。在genebank中搜到目的基因的全长mRNA序列;
2。确认目的片段的编码序列,也就是CDS;
3。根据CDS,在ATG及终止密码前后的序列来设计最佳引物;
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那么所谓的全长就是指cDS了???而并非指整个mRNA序列?
http://snapshot.soso.com/snap.cgi?d=10476009602244316193&w=pcr+%BB%F1%C8%A1%C4%BF%B5%C4%BB%F9%D2%F2&u=http://www.antpedia.com/news/67/t-71667.htmlhttp://snapshot.soso.com/snap.cgi?d=10476009602244316193&w=pcr+%BB%F1%C8%A1%C4%BF%B5%C4%BB%F9%D2%F2&u=http://www.antpedia.com/news/67/t-71667.html