9

9.5 微生物的接种

要开展微生物的培养观察活动,就必须有菌种。对初次接触微生物的中学生来说,菌种可以从科研部门、生产单位得到。然而,要想将所得到菌种进行培养和长期保留,就必须学会接种技术,以使菌种能够“传宗接代”。

一、接种的前提条件

要保证接种成功,必须具备两个前提条件。一是要使接种能在无菌的环境中进行,即须在灭过菌的无菌室或接种箱中进行;而且操作者必须用肥皂洗手,须穿着干净整洁的衣服,最好配戴口罩;接种用的各种用具也应经过灭菌。二是要使被接种的培养基完全无菌,即必须将培养基灭菌后方能用于接种。

二、接种方法

微生物的接种方法很多,往往因实验目的不同而有不同的接种方法,如斜面接种法、液体接种法、由液体培养基接种到液体培养基法、以及穿刺接种法等,其中以斜面接种法最为常用。

1.斜面接种法

将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的方法,称为斜面接种法(图9-5)。其方法步骤如下:

首先,点燃酒精灯。将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上,用拇指与其它四指夹住,并使中指位于两试管之间,两试管的管口齐平(图9-5①)。

其次,用右手先将棉塞拧转松动,并稍拉出一些,以利接种时拔出(图 9-5②)。

第三,右手持接种针,在酒精灯将针头部分烧红灭菌(图9-5③)。针头以上凡是接种时可能进入试管的部分,均应用火灼烧。

以下操作都要使试管口靠近火旁。

第四,用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞,同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼3秒钟左右,使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死(图9-5④)。

第五,将烧过的接种针伸入菌种管内,先将针头接触培养基上没有菌的部位(如斜面的顶端),使其冷却,以免烫死被接种的菌体。然后轻轻接触菌体,取出少许,慢慢将接种针抽出试管,接种针抽出时不要使针头部分碰到管壁和管口,取出后,不可使针头通过火焰,更不可触及其它无关物品或桌面(图9-5⑤)。

第六,迅速将接种针伸进另一试管,在培养基上轻轻划线,接种菌体于其上。划线时,要由底部起划较密的平行线,一直划到顶部,以充分利用斜面面积,但不要将培养基划破(图9-5⑥)。

第七,烧灼试管口,将棉塞塞上。塞棉塞时,不要移动试管迎接棉塞,以免试管在移动中纳入可能含菌的空气(图9-5⑦)。

第八,将针头在火焰上烧灼灭菌。放回原处后,腾出手将棉塞塞紧(图9-5⑧)。

2.液体接种法

是一种由斜面菌种接种到液体培养基中的方法。

接种方法与斜面接种法相同,但手持试管时,应使试管略向上斜,以免培养基流出。

将带有菌种的接种针送入液体培养基时,可使针头部分在液体表面与管壁接触的部位轻轻摩擦。接种后,塞上棉塞,烧灼接种针。最后将试管在手掌上轻轻打动,使菌体在培养基中均匀散开。

3.由液体培养基接种到液体培养基法

由于菌种是液体,常应用移液管或无菌滴管接种。无菌操作的注意事项与液体接种法相同,只是移液管、滴管不能在火上烧灼,而要预先经过灭菌。

4.穿刺接种法

是一种由斜面菌种接种到固体深层培养基的方法。

接种方法与斜面接种法相同,但接种针必须很挺直。用接种针取出菌种后,移入固体深层培养基,自培养基中心刺入,直到接近管底,但不要穿透。然后慢慢拔出。这样,可使接种线整齐,易于观察。